Метод хроматографии (распределения на бумаге)

В 1944 г. английски­ми учеными Консденом, Гордоном и Мартином был предложен метод хро­матографии (распределения на бумаге). Метод этот в отличие от клас­сического метода М. С. Цвета основан не на адсорбции, а на различии зна­чений коэффициентов распределения у разделяемых веществ между двумя несмешивающимися фазами (водой и органическим растворителем).

Коэффициентом распределения называется отноше­ние между концентрацией вещества в водной фазе (мг/мл) и концентрацией вещества в неводной фазе (мг/мл).

Практически при определении аминокислот поступают следующим об­разом. Лист специальной фильтровальной бумаги помещают во влажную камеру, причем он удерживает 20—22% воды. Водная фаза неподвижна, так как вода прочно удерживается бумагой. В качестве подвижного органиче­ского растворителя берут растворы бутанола, крезола и других веществ. Вырезанную полоску фильтровальной бумаги с нанесенными на нее капля­ми испытуемого вещества и чистых растворов определенных аминокислот (свидетели) вносят в стеклянную камеру с находящейся внизу чашкой, со­держащей раствор воды и органического растворителя, и выдерживают 18—20 часов. За это время растворитель проходит от 25 до 40 см. Такой метод называется восходящей хроматографией; при нисхо­дящей — сосуд с растворителем устанавливается на подставке (рис. 98, I).

Затем бумагу высушивают в сушильном шкафу 1,5—2 часа при 100 °C и опрыскивают из пульверизатора 0,1% раствором нингидрина в бутаноле и затем опять подсушивают 5—7 минут для проявления окрашивания отдель­ных пятен аминокислот. Большинство аминокислот дает лиловую окраску.

Хроматографический метод позволяет учесть доли миллиграмма ве­ществ. В настоящее время этот метод разработан не только для учета ами­нокислот, но и сахаров, органических кислот и других соединений. Материал с сайта http://worldof.school

Рис 98. Хроматография на бумаге. I. Схема прибора для нисходящей хроматографии на бумаге: 1 — стеклянный сосуд; 2 — поддерживающая стойка; 3 — сосудик с растворителем; 4 — лист хроматографической бумаги; 5 — место нанесения проб; 6 — фронт растворителя; 7 — при­тертая крышка. II. Хроматограмма аминокислот, входящих в состав белков сахарной свеклы. Хроматограмма нисходя­щая. Растворитель верхняя фракция смеси бутанол — уксусная кислота — вода в соотношении 4:1:5. Разделение аминокислот осуществлялось 3-кратным доведением фронта растворителя до нижнего края бумажной полосы. Проявление 0,5% раствором нингидрина в этиловом спирте. Слева — свидетели: 1 — глютатион (отсутствует); 2 — цистин; 3 — лизин; 4 — гистидин; 5 — аргинин; 6 — аспарагиновая кис­лота; 7 — серин + глицин; 8 — глютаминовая кислота + треонин; 9 — аланин; 10 — пролин; 11 — аминомасляная кислота; 12 — тирозин; 13 — валин + метионин; 14 — фенилаланин; 15 — лейцин

На этой странице материал по темам:

• Ботаника растения методы хроматографии